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看完本篇你就知道什么是蛋白層析柱了

更新時間:2024-08-08      點擊次數(shù):2783

  蛋白質(zhì)是生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ),也是生物體內(nèi)的功能性大分子。隨著分子生物學(xué)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)、生物制藥行業(yè)等研究的不斷深入,蛋白質(zhì)純化成為近年來越來越熱的研究話題。

  蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細純化階段兩個階段。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細胞成分如RNA、DNA 等分開,常用的方法為硫酸銨沉淀法。

  精細純化階段的目的是把目的蛋白與其他大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開來,常用的方法有:凝膠過濾層析、離子交換層析、疏水層析、親和層析等。其中,凝膠過濾層析是常見的純化手段之一。

  蛋白層析柱是一種根據(jù)分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)的方法。不同蛋白的形狀及分子大小存在差異,在混合物通過含有填充顆粒的凝膠過濾層析柱時,由于各種蛋白的分子大小不同,擴散進入特定大小孔徑顆粒內(nèi)的能力也各異,大的蛋白分子會被先洗脫出來,分子越小,越晚洗脫,從而達到分離蛋白的目的。

  凝蛋白層析柱中的填料大多是交聯(lián)的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質(zhì),在不同的流動相中溶脹變化差異比較大,因此,蛋白層析柱管也不同一般的玻璃柱,柱床長度通??烧{(diào)節(jié),分為一端可調(diào)軸向壓縮和兩端可調(diào)軸向壓縮柱。匯通色譜現(xiàn)推出BSXK夾套式蛋白層析柱和Better Glass系列蛋白層析柱,廣泛應(yīng)用于蛋白、多肽、抗體、酶、病毒、重組蛋白等生物分子純化。

 

  下面讓我們來了解一下蛋白層析柱的特點有哪些。

  1、柱塞設(shè)計,柱填裝體積可根據(jù)需要自行調(diào)整,一根柱管就可代替多根固定柱管;

  2、人性化設(shè)計,操作簡單,清洗方便,易于拆卸組裝;

  3、流路多為惰性材料,溶劑耐受性能好;

  4、篩板孔徑可自定義,適用于各種規(guī)格填料;

  5、無截留死體積,保證內(nèi)部填料分布均勻,重現(xiàn)性好;

  6、關(guān)鍵部分采用PEEK材質(zhì),生物兼容性好;

  7、夾套可維持一定的熱穩(wěn)定操作溫度,針對敏感樣品純化具有冷卻外殼;

  8、BSXK空柱管材料為高硼硅玻璃,可以目測到柱床狀態(tài),及時進行色譜柱重新填裝,提高實驗效率;

  9、玻璃材質(zhì)使分離過程更加直觀;

  10、種類豐富,可根據(jù)要求選定一端可調(diào)軸向壓縮和兩端可調(diào)軸向壓縮柱;

  應(yīng)用范圍

  ●蛋白純化:用于從復(fù)雜混合物中純化出目標(biāo)蛋白質(zhì),廣泛應(yīng)用于生物制藥和生物化學(xué)研究。

  ●核酸純化:部分層析技術(shù)也可用于純化核酸等其他生物大分子。

  操作步驟

  ●裝柱:選擇適合的層析介質(zhì)裝填入柱,確保介質(zhì)均勻無氣泡。

  ●平衡:用緩沖液預(yù)先平衡層析柱,準(zhǔn)備樣品上樣。

  ●上樣:將準(zhǔn)備好的蛋白質(zhì)樣品緩慢加入柱頂,避免擾動床層。

  ●洗脫:根據(jù)層析類型,采用適當(dāng)?shù)南疵撘簩⒔Y(jié)合的蛋白質(zhì)按順序從柱中洗脫出來。

  ●收集:從柱出口收集洗脫液,并進行檢測和分析,以獲得純化后的蛋白質(zhì)

 

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